高效能液相層析法 HPLC

高效能液相層析法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）隨著搭配的移動相、管柱以及偵檢器的不同，可以分析的樣品種類很多元，是個很強的分析儀器。近幾年也開發出更高階的機台「UPLC」，操作與 HPLC 相似(但移動相須過0.2um濾膜)，甚至可以藉由轉換器將 HPLC 的參數直接做調整應用於 UPLC 上可大幅縮短分析時間。

分析原理

移動相

1. 等比例沖提 Isocratic elution
2. 梯度沖提 Gradient elution
   - 增強分離能力、有效減少分離時間
   Notice 在線混和 mobile phase有時容易產生氣泡，溶劑須做好gegas

管柱(依分離模式做分類)

1. 正向 Normal phase
   - 使用低極性溶劑，若要長時間使用機台需更換管路。
2. 逆向 Reverse phase
3. 離子交換 Ion exchange
4. 粒徑篩析/膠體 Size exclusion/Gel (SEC or GPC)
   Notice 非常用溶劑要先確認此溶劑濃度對於管線有沒有傷害

USP 針對管柱也有做自己的分類，甚至可以找到藥典上的分析管柱是使用「哪一型 號」的管柱。

偵檢器種類

1. 紫外/可見 UV/Vis
2. 光電二極體陣列 Diode array detectors, PDA
   - 全波長偵檢器，主要用來判斷peak purity
3. 折射率 Refractive Index, RI
   - 無法搭配梯度沖提，機台與管柱平衡時間較長
4. 揮發性光散射偵測器 Evaporate light scattering detector, ELSD
   - 數據再現性不穩定，在規格方面或許要放寬
5. 質譜 Mass spectrometry, MS
6. 電化學 Electrochemistry
7. 導電度 Conductive
8. 螢光 Photoluminescence detector, FLD

LC 「眉角」實在太多了，LoMei 只針對自己用過的然後有特別需要注意的地方做簡述。可能是之前太混，還記得第一次聽到叫我去借 Normal phase 機台時臉上滿臉問號？那是 HPLC 的一種嗎？只有一片空白。